青岛海博RTCSP002 大肠菌群测试片说明书

大肠菌群测试片使用说明书

【产品名称】中文名称：大肠菌群测试片（简称：CC）英文名称：Coliform Count Plate

【产品货号】RTCSPO02【包装方式】20片/包。

【储存条件与保质期】2℃～8℃密封储存，有效期为18个月。使用前先将测试片恢复至室温后再加入样液。已打开包装未使用的测试片需要将测试片放回袋中，铝箔袋二次折叠后用胶布黏上或封口夹封口，2℃~8℃储存，并于一个月之内用完。未开封的测试片可在常温下运输及短期保存。

【产品用途】适用于食品、食品原材料、饮用水及环境中大肠菌群的测定。

【产品简介】大肠菌群测试片为完全即用型培养基产品，其成分为蛋白胨、酵母浸粉、乳糖、氯化钠、胆盐、中性红、结晶紫等，符合GB4789.3标准对测试片的要求。为了更好的进行菌落计数和判读，培养基中采用双显色剂。本产品采用直径为7cm的培养板，接近直径9cm的培养皿，方便菌落观察和计数。

【操作步骤】

1.样品制备称取样品25g(mL）置于盛有225mL稀释液(磷酸盐缓冲液或生理盐水）的无菌均质袋内，均质1min~2min，制成1：10的样品匀液。特别注意：若样品过酸或过碱时，用1mol/LNaOH或1mol/LHC1溶液调节样品匀液pH至6.8~7.2之间。

2.样品稀释用1mL无菌吸管或移液器吸取1:10匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，使用振荡器振摇后制成1：100的样品匀液，以此类推，制备10倍系列稀释的样品匀液，每次换一支吸管或移液枪头。

3.接种根据对样品微生物污染状况的估计，选择2~3个稀释度样品匀液进行接种检测，液体样品包括原液。每个稀释度接种不少于两张测试片。测试片使用前，自然平衡至室温。将测试片放在水平试验台上，缓慢揭开上层膜，将1mL样品匀液垂直滴加在测试片中心区域。缓慢盖上上膜，尽量避免气泡的产生，样液会自动均匀扩散。

4.培养将测试片正置于培养箱内，最多可堆叠至20片。置于36℃±1℃（乳及乳制品30℃±1℃），培养18h～24h。

5.结果计数肉眼观察，必要时借助菌落辅助计数装置，计数蓝紫色带有气泡的菌落。合适的计数范围在15CFU～150CFU。记录稀释倍数和相应的菌落数量。应注意的是，若整个培养区域均呈蓝紫色且无法计数，可能是菌浓度过高，需对样品进一步稀释以获得更准确的计数。如需分离菌落进行进一步分析，揭开上层膜用接种针将菌落挑出使用。

6.计数要点(1)当菌落数量过多计数困难时，可选择几个有代表性菌落的小方格，计算平均菌落数，再乘以38，即可得到整个测试片的估算菌落数；（2)整片变色，注意观察下一个稀释度的菌落数，若下一个稀释度有菌落且在最佳计数范围内，应计数该稀释度的菌落数，若无菌落，可能是样品或稀释液存在问题；（3)36℃±1℃、30℃±1℃培养温度并非适用于全部样本类型，有特殊培养需要，建议用户多条件对比观察。

【结果判读】

1.目标菌产气泡所形成的菌落状态呈现多种情况

（1）典型菌落为：一个菌落产生两个气泡或多个气泡，如图①②③；

（2）一个菌落产生一个气泡，菌落在气泡中心或边缘，如图④⑤；

（3）一个菌落产生的气泡将菌落撑破，导致菌落被分成多部分在气泡的边缘，如图⑥⑦；

（4）操作不当，可能导致测试片内有气泡，此气泡与菌一般不相连，如图⑧。

2.多个菌落产生的气泡可能相连，如图⑨。

【操作图解及视频】

【废弃物处理】测试片在使用后，需在121℃、30min高压蒸汽灭菌处理后严格遵守生物危害废弃物的处置规定处理。

【注意事项】（1）取放测试片时，不要触碰培养基检测区域；（2)计数时，可使用记号笔或菌落计数器，菌数过多时，可通过方格估算菌数；（3)测试片不应放置于日光、紫外或荧光灯下直射；(4)不要使用污染的测试片；（5）使用后的测试片严格按照废弃物处理进行。

【用户需知】由于食品基质的复杂性，选择测试片检测方法时，务必考虑到取样方法、检测方案、样品制备、处理和实验室技术等外部因素，这些因素都可能会影响结果。部分食品样品本身也可能会影响测试结果。在选择本品进行大肠菌群测定前，您应先评估该产品及所选方法是否符合特定食品基质和目标微生物。建议选择足够的样品进行验证。测试片质检方法可参考《GB4789.28-2024食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》附录F中结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA)的质量控制标准。如果您在使用时，发现或证明本品存在缺陷，请及时联系青岛海博生物销售代表或其经销商，进行产品换货或退款处理。